免(miǎn)疫(yì)膠體金(jīn)定性檢(jiǎn)測(cè)因其(qí)快速(sù)，簡便，在醫院檢(jiǎn)驗科已(yǐ)廣(guǎng)泛應用(yòng)，用(yòng)於(yú)妊娠早期(qī)診(zhěn)斷的(dí)人絨(róng)毛(máo)膜(mó)促性腺激(jī)素(HCG)膠(jiāo)體金(jīn)法診斷試劑(jì)製造(zào)及檢(jiǎn)定(dìng)規(guī)程已由中國生物(wù)製(zhì)品規(guī)程公布，但尚未能(néng)達到定(dìng)量的水平(píng)。免(miǎn)疫膠(jiāo)體金(jīn)技(jì) 術常(cháng)用於定性檢(jiǎn)測微生物(wù)感染(rǎn)，近年(nián)上已(yǐ)有(yǒu)商品化免疫膠(jiāo)體(tǐ)金定量檢測試(shì)劑(jì)供應，較(jiào)有(yǒu)代(dài)表(biǎo)性(xìng)的是(shì)挪(nuó)威Axis-Shield公司(sī)生(shēng)產的NycoCard C 反應蛋白定(dìng)量，尿微量白蛋白定量，D-二聚體定(dìng)量(liáng)試劑盒，他們(mén)使(shǐ)用超(chāo)微顆(kē)粒膠體(tǐ)金(jīn)和(hé)硼酸(suān)鹽緩衝(chōng)液(yè)使液(yè)相免疫膠(jiāo)體金(jīn)有較好的(dí)穩定性(NycoCardl 114365.Ed.581 July 2001)，但尚未(wèi)見(jiàn)有HCG膠體金凍幹品。
免疫膠體(tǐ)金(jīn)技術(shù)快(kuài)速又(yòu)簡便，所(suǒ)以廣(guǎng)受(shòu)歡迎(yíng)，但要測(cè)定(dìng)結(jié)果非常準確(què)， 則(zé)免(miǎn)疫膠體金(jīn)必須(xū)有良好的穩定(dìng)性，這在(zài)免(miǎn)疫膠體金定(dìng)量檢測中(zhōng)尤為(wéi)重要(yào)，是發(fā)展(zhǎn)金標法(fǎ)快速定量檢測試劑(jì)的前(qián)提。
*生物(wù)製品(pǐn)凍(dòng)幹形式(shì)可(kě)以延長(cháng)其有(yǒu)效(xiào)期，在產(chǎn)品運輸(shū)過程中不必低(dī)溫(wēn)運輸(shū)。但(dàn)免疫(yì)膠體金(jīn)的膠體性(xìng)能(néng)使(shǐ)它(tā)在(zài)凍幹(gān)中會(huì)發生破(pò)乳現(xiàn)象，嚴(yán)重的破乳會造(zào)成肉(ròu)眼可(kě)見的(dí)顆粒(lì)凝聚。輕(qīng)度(dù)的破(pò)乳(rǔ)引起(qǐ)的微量顆粒(lì)凝聚， 在檢(jiǎn)測(cè)過程中因直(zhí)徑(jìng)增大而通(tōng)不(bù)過(guò)微孔纖維膜，滯留(liú)在膜(mó)上的(dí)紅(hóng)色凝聚(jù)顆 粒就誤報為(wéi)假(jiǎ)陽(yáng)性的結(jié)果。因(yīn)此(cǐ)膠體金的凍(dòng)幹存在技術突(tū)破。
解決的(dí)技術(shù)問(wèn)題(tí)是克服液(yè)相(xiāng)免(miǎn)疫膠體金穩定(dìng)性差的(dí)缺陷以及(jí) 膠體(tǐ)金(jīn)凍幹(gān)品製備(bèi)中的(dí)破乳現(xiàn)象，提(tí)供一(yī)種(zhǒng)具有良好穩定(dìng)性(xìng)，能定(dìng)量檢(jiǎn)測 人絨毛膜(mó)促性腺(xiàn)激素(HCG)的膠(jiāo)體金(jīn)凍幹(gān)品。
一種定量檢測人絨毛膜(mó)促性(xìng)腺激(jī)素(HCG)膠體金(jīn)凍幹(gān)品的(dí)製(zhì)備方(fāng)法包括如下步驟：
1.製備抗(kàng)HCG抗體包被膠體(tǐ)金
常規(guī)製(zhì)備(bèi)空(kōng)白的粒徑(jìng)20nm左右的膠(jiāo)體金(jīn)，呈透明(míng)的紅色或(huò)桔(jié)紅(hóng)色， PH 5.4～5.6，在520nm，1厘米光徑(jìng)時光吸收值OD在0.9～1.2。然後以(yǐ) 抗HCG抗體(tǐ)包(bāo)被膠體(tǐ)金(jīn)，抗體(tǐ)包被濃度0.01～0.05mg/ml，離心(xīn)作(zuò)結合/ 遊(yóu)離(lí)(B/F)分離；
2.製(zhì)備(bèi)膠(jiāo)體金溶(róng)液(yè)：
(1)混(hùn)合裂(liè)解與(yǔ)不裂解的2，2’-[(1-甲(jiǎ)基亞乙基)雙(4，1-亞苯(běn)基 甲醛(quán))]雙(shuāng)環氧乙烷(wán)聚(jù)乙二醇衍生化合(hé)物(wù)。
濃度分別為：裂解物0.2mg～10.0mg/m1；不裂解物 0.2mg～10.0mg/ml。
上述裂解(jiě)或不裂解物在(zài)上述濃(nóng)度範(fàn)圍(wéi)內可(kě)以(yǐ)用任意比例混合，優(yōu) 選比例是1∶1；
以上雙環(huán)氧乙烷聚(jù)乙二(èr)醇(chún)衍(yǎn)生化合(hé)物的(dí)裂(liè)解采(cǎi)用如下方法(fǎ)；
稱(chēng)聚(jù)乙二醇衍生化(huà)合(hé)物(美國Sigama公(gōng)司，產(chǎn)品編(biān)號P2263，mp59 ℃，白色(sè)片狀結晶，溶於水，分(fēn)子量15000～20000)50克，置三(sān)角燒(shāo)瓶(píng)中(zhōng) 在石棉(mián)網上以微(wēi)火(huǒ)加(jiā)熱(rè)使(shǐ)其(qí)熔(róng)化(huà)，保持(chí)微沸(fèi)4～5分鐘，室溫(wēn)冷(lěng)卻(què)到40～50 ℃時(shí)加(jiā)入(rù)1升蒸餾水(shuǐ)，均(jūn)匀溶解(jiě)後(hòu)即(jí)為(wéi)5％裂(liè)解物(wù)；稱上述聚(jù)乙二醇衍生化(huà) 合(hé)物50克，加(jiā)入(rù)1升(shēng)蒸餾水(shuǐ)，均(jūn)匀溶解(jiě)後即為5％不(bù)裂解物(wù)。
(2)離(lí)心分離(lí)後的(dí)抗HCG膠體金(jīn)沉澱(diàn)以(yǐ)原(yuán)體積1/5的含上述裂(liè)解和不(bù)裂(liè) 解物各2mg/ml，1～12％蔗(zhè)糖，10-20mM磷(lín)酸(suān)鹽緩衝液PH 7.4懸(xuán)浮；
3.製備膠體(tǐ)金凍(dòng)幹品
將膠體(tǐ)金溶(róng)液在-40℃預凍(dòng)，轉(zhuǎn)入(rù)凍幹機(jī)作冷(lěng)凍幹燥(zào)，升(shēng)溫≤25℃。
B/F分離時如(rú)不(bù)加(jiā)穩定(dìng)劑，離心(xīn)後(hòu)全(quán)部(bù)膠(jiāo)體金(jīn)消失(shī)，隻(zhī)剩下少許(xǔ)片(piàn)狀(zhuàng)金屬不(bù)溶(róng)物(wù)，加(jiā)入(rù)不同的穩(wěn)定(dìng)劑保護(hù)。
OD值(zhí)越高說明(míng)片狀(zhuàng)金(jīn)屬不溶物(wù)越少，穩定劑(jì)的效(xiào)果越顯(xiǎn)著(zhù)。2，2’-[(1- 甲基亞乙(yǐ)基)雙(shuāng)(4，1-亞苯基(jī)甲醛)]雙(shuāng)環氧乙烷(wán)聚乙(yǐ)二(èr)醇(chún)衍(yǎn)生化(huà)合物或其(qí)裂解物或二者混合物(wù)為(wéi)穩定劑時(shí)的OD值相(xiāng)對(duì)傳統(tǒng)穩(wěn)定劑聚(jù)乙(yǐ)二醇(chún)20000 (PEG)較(jiào)高(gāo)，保護(hù)*。
上述穩(wěn)定劑(jì)也可用於(yú)其(qí)它免疫膠體(tǐ)金，例如葡萄球菌(jūn)A蛋(dàn)白(SPA)- 膠體金綴合物，用於臨(lín)床血(xiě)清(qīng)樣(yàng)品中有關病原體的IgG抗體檢測(cè)。
製(zhì)備(bèi)免疫膠(jiāo)體(tǐ)金(jīn)凍(dòng)幹(gān)品時(shí)除了含有上(shàng)述穩定(dìng)劑(裂解或(huò)不(bù)裂解聚 乙二(èr)醇衍(yǎn)生化(huà)合物)外，必須(xū)含有1～12％蔗(zhè)糖(táng)，否(fǒu)則(zé)凍幹(gān)品必(bì)會有輕度(dù)的(dí)破(pò)乳(rǔ)，引(yǐn)發一定(dìng)數量(liáng)的假陽(yáng)性，蔗(zhè)糖(táng)的(dí)加入(rù)量在(zài)此(cǐ)範圍即(jí)可，與(yǔ)其(qí)它(tā)穩定(dìng)劑無比例關(guān)係。
以上出自作(zuò)者徐(xú)建新(xīn)的(dí)《定量檢(jiǎn)測(cè)人(rén)絨(róng)毛膜促性(xìng)腺(xiàn)激(jī)素(sù)膠體(tǐ)金凍(dòng)幹品(pǐn)及製備方(fāng)法(fǎ)》。
