重組(zǔ)酶聚合酶擴(kuò)增技術(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)能夠在 恒(héng)溫條(tiáo)件下(37℃-42℃)實現(xiàn)對(duì)核(hé)酸的(dí)快速特異(yì)性擴增(zēng)，且在20min內(nèi)可將(jiāng)核酸擴(kuò)增至(zhì)可檢(jiǎn) 測(cè)水(shuǐ)平，具(jù)有良(liáng)好的可(kě)操(cāo)作(zuò)性(xìng)，能(néng)夠在非實驗室條件下完(wán)成核(hé)酸(suān)檢測，被稱(chēng)為是(shì)具有(yǒu)可替代(dài)PCR潛(qián)力(lì)的(dí)核酸(suān)檢(jiǎn)測技(jì)術，且(qiě)可以和(hé)瓊(qióng)脂糖凝(níng)膠(jiāo)檢測，熒(yíng)光檢測(cè)技術(shù)結合(hé)實現實(shí)時(shí)，快速甚至(zhì)定(dìng)量(liáng)檢測(cè)。常溫(wēn)等(děng)溫，是指(zhǐ)維持在某(mǒu)一特(tè)定(dìng)的(dí)溫(wēn)度，溫(wēn)度為(wéi)22-42℃，接近(jìn)常(cháng)溫(wēn)，溫度(dù)保(bǎo)持恒定，因為(wéi)這種(zhǒng)反應(yīng)對(duì)設(shè)備(bèi)的要求比(bǐ)較低(dī)，更適合(hé)應用(yòng)於POCT或者即時(shí)診斷。
常(cháng)規的RPA檢(jiǎn)測試劑需(xū)低(dī)溫(wēn)保存(cún)，運輸(shū)，並(bìng)且反復(fù)凍(dòng)融(róng)會影響性能的穩定。因此，開發(fā)常(cháng)溫下(xià)穩(wěn)定保(bǎo)存，便(biàn)於運輸的試RPA劑至(zhì)關(guān)重(zhòng)要(yào)。將RPA檢測試(shì)劑(jì)製備(bèi)成為(wéi)凍(dòng)幹試劑是(shì)解(jiě)決上述問題的(dí)可(kě)行(háng)思路。然而(ér)，RPA與CRISPR檢(jiǎn)測(cè)試(shì)劑(jì)是(shì)一種(zhǒng)成(chéng)分復雜(zá)的組合(hé)物(wù)，特別(bié)是凍幹(gān)的RPA試劑(jì)與凍幹(gān)的CRISPR試(shì)劑(jì)再反(fǎn)應過(guò)程中會混合為一(yī)個體(tǐ)係，其成分進(jìn)一步復雜化，包含DNA，RNA和酶，凍(dòng)幹成分等(děng)物(wù)質(zhì)。因(yīn)而，在開(kāi)發具體的檢測(cè)試劑(jì)過程中，如何(hé)改進(jìn)凍幹試(shì)劑(jì)的組(zǔ)成(chéng)，特(tè)別是如何設(shè)置凍(dòng)幹保(bǎo)護劑的組成，進(jìn)而(ér)保(bǎo)證檢測(cè)試(shì)劑(jì)的穩定性(xìng)，避免其(qí)性(xìng)能(néng)降(jiàng)低，這是一(yī)個重要(yào)的問(wèn)題。
RPA試劑包含緩衝(chōng)液，重組(zǔ)酶，DNA 聚合酶，逆(nì)轉(zhuǎn)錄(lù)酶，dNTP ，ATP和PEG 35000等。在(zài)常溫下實現反應。
1. 緩衝液：緩(huǎn)衝(chōng)液是RPA試劑中(zhōng)常見的成分之一(yī)，它有(yǒu)助於(yú)維持(chí)反應體係的pH值(zhí)穩定，從而確(què)保(bǎo)反(fǎn)應的準(zhǔn)確性和可(kě)靠(kào)性。
2. 酶：酶是RPA試(shì)劑(jì)中(zhōng)的關鍵成分(fēn)，包含重組酶，DNA聚(jù)合酶，逆轉錄(lù)酶(méi)等，它(tā)們(mén)負(fù)責(zé)催化特定的化(huà)學(xué)反應(yīng)。
3. 引物：引物是用於PCR（聚合(hé)酶鏈(liàn)式(shì)反應）等(děng)反應(yīng)的(dí)特異(yì)性(xìng)DNA片(piàn)段，它們(mén)幫助(zhù)擴(kuò)增(zēng)目標DNA序列。包括(kuò)一對(duì)或者多對引物(wù)。
4. 熒光染料(liào)：用(yòng)於(yú)實(shí)時(shí)PCR等(děng)需要熒光(guāng)檢測(cè)的技術(shù)中(zhōng)，幫(bāng)助實時監(jiān)測反應進程(chéng)。
由於(yú)RPA試劑包含多重成(chéng)分，成分復(fù)雜，如(rú)各(gè)種酶(méi)，相互耐受溫度，環(huán)境(jìng)都不(bù)一(yī)樣，保(bǎo)存條件很(hěn)苛刻，而(ér)凍(dòng)幹成(chéng)為解(jiě)決保(bǎo)存的方法之一(yī)。凍幹法(fǎ)是(shì)采用低溫(wēn)升(shēng)華(huá)的方法(fǎ)，這(zhè)種情況(kuàng)下不(bù)改(gǎi)變(biàn)物質(zhì)的(dí)特(tè)性，降(jiàng)低到很低(dī)的(dí)含(hán)水量，鎖(suǒ)住物質本身(shēn)的(dí)活(huó)性(xìng)，復(fù)溶後(hòu)恢復活(huó)性(xìng)，獲得液體狀(zhuàng)態(tài)下(xià)或者(zhě)物質本身的新鮮狀態(tài)。而(ér)RPA試劑凍幹不同於(yú)常規(guī)的(dí)PCR試劑，由於(yú)其成(chéng)分(fēn)復雜，因(yīn)此凍幹(gān)保護(hù)劑和(hé)凍幹(gān)曲綫需要摸(mō)索(suǒ)。我公(gōng)司在開發過(guò)程中建(jiàn)立了(liǎo)各種試(shì)劑的凍幹(gān)保(bǎo)護體(tǐ)係和凍幹曲(qū)綫，購(gòu)買任(rèn)意(yì)一(yī)款(kuǎn)矽油循(xún)環(huán)凍(dòng)幹機(jī)，我(wǒ)公司都可以提(tí)供(gōng)免費的凍幹(gān)技術協助。歡(huān)迎(yíng)資(zī)料RPA凍幹試劑(jì)凍幹設(shè)備(bèi)，凍幹微球成型(xíng)儀(yí)，微(wēi)球(qiú)分(fēn)裝機。
