熒光pcr凍幹粉(fěn)和(hé)普通的(dí)pcr相(xiāng)比(bǐ)具(jù)有很多(duō)優點(diǎn)，可(kě)以常(cháng)溫運輸(shū)，常溫(wēn)儲(chǔ)存，保存(cún)時間長(cháng)，使(shǐ)用(yòng)方(fāng)便，性質(zhì)穩定(dìng)等。但(dàn)是熒光PCR試劑(jì)並不是拿過來放(fàng)進(jìn)凍幹機(jī)中(zhōng)就(jiù)可以(yǐ)直接凍(dòng)幹了，凍幹(gān)物質的(dí)共(gòng)同(tóng)特(tè)點是基本(běn)上90%以上(shàng)的凍(dòng)幹(gān)物質(zhì)都需要添(tiān)加(jiā)凍(dòng)幹(gān)保護(hù)劑包(bāo)括(kuò)賦(fù)形(xíng)劑，否則容易不成型或(huò)者(zhě)凍(dòng)出(chū)來不理想。
那(nà)麼熒(yíng)光(guāng)PCR試劑凍(dòng)幹(gān)常采用哪些凍幹保護劑(jì)呢(ní)？首先我們(mén)先(xiān)來看兩個發明。以下出(chū)自(zì)發明(míng)專：
1，本發(fā)明提供(gōng)一種凍幹(gān)添(tiān)加劑(jì)及熒光PCR反(fǎn)應(yīng) 混合物幹粉和製備方法，具(jù)體(tǐ)涉及生物技術(shù)領(lǐng) 域，凍幹(gān)添加劑(jì)包(bāo)括(kuò)A組(zǔ)分(fēn)和B組分(fēn)，A組分由(yóu)二硫(liú)蘇(sū)糖(táng)醇，吐(tǔ)溫(wēn)20，海藻(zǎo)糖，明膠(jiāo)和BSA組成(chéng)，B組分(fēn) 由叔丁醇組成。將(jiāng)該(gāi)A組分加(jiā)入(rù)到熒(yíng)光PCR反應(yīng)混(hùn)合(hé)物(wù)原液(yè)的其他組(zǔ)分中存(cún)儲待(dài)用(yòng)，凍(dòng)幹(gān)前(qián)再(zài)將B 組分(fēn)加(jiā)入獲(huò)得(dé)熒光(guāng)PCR反應混(hùn)合物原液，後凍(dòng) 幹得到(dào)熒光(guāng)PCR反應(yīng)混合(hé)物幹粉(fěn)。本發明製備的 熒光PCR反應(yīng)混(hùn)合物(wù)幹(gān)粉保證(zhèng)擴(kuò)增(zēng)性(xìng)能(néng)的同(tóng)時， 縮短(duǎn)凍幹時(shí)間，減(jiǎn)少(shǎo)凍幹成本，並(bìng)使(shǐ)凍(dòng)幹(gān)後(hòu)的成 品結實，不易(yì)碎(suì)，並(bìng)且能(néng)長(cháng)期保存。該發(fā)明出自(zì)《一種(zhǒng)凍幹添加劑及熒光(guāng)PCR反應混合物(wù)幹粉(fěn)和製備(bèi)方(fāng)法》。
2，本(běn)發明公(gōng)開(kāi)一種熒光(guāng)PCR試(shì)劑的凍幹保護劑 以(yǐ)及(jí)凍(dòng)幹(gān)芯片(piàn)的製(zhì)備方法，涉(shè)及生物(wù)檢測技(jì)術領(lǐng) 域。所述凍幹保護劑(jì)為(wéi)由以下組分(fēn)製備(bèi)得到的溶 液：海藻(zǎo)糖(táng)，棉子糖，右旋糖(táng)酐(gān)，甘油(yóu)，以(yǐ)及(jí)焦(jiāo)磷酸(suān)二乙酯處理過的水(shuǐ)。由(yóu)該(gāi)凍幹(gān)保護劑製(zhì)備(bèi)得到(dào)的(dí)熒光PCR凍幹製(zhì)劑可長(cháng)期(qī)常(cháng)溫保存(cún)，且(qiě)復溶速(sù)度快。本發明還提(tí)供一種包(bāo)括(kuò)上述(shù)凍(dòng)幹(gān)保護(hù)劑的熒(yíng)光PCR凍幹(gān)芯(xīn)片的製備(bèi)方(fāng)法，該(gāi)方(fāng)法(fǎ)簡單(dān)快速，可在八小(xiǎo)時內完成凍(dòng)幹步(bù)驟。該發明出自《熒光PCR試劑的凍幹(gān)保(bǎo)護(hù)劑以及(jí)凍幹(gān)芯(xīn)片(piàn)的製(zhì)備(bèi)方(fāng)法》。
通(tōng)過以上(shàng)兩(liǎng)個(gè)發明可以看(kàn)出熒光(guāng)PCR試劑的凍幹保護(hù)劑(jì)常(cháng)用的包(bāo)括：1，糖類和多(duō)元醇(chún)類(lèi)。糖類(lèi)有(yǒu)單(dān)糖，低聚糖(táng)，多糖(táng)。其中(zhōng)海藻糖和棉子(zǐ)糖屬(shǔ)於低(dī)聚糖(táng)，一般(bān)凍(dòng)幹保(bǎo)護(hù)劑中的糖多(duō)用低(dī)聚糖或者(zhě)單(dān)糖(táng)和其(qí)他(tā)保護劑(jì)連(lián)用(yòng)。海藻糖和(hé)蔗糖(táng)是(shì)糖類中(zhōng)zui常(cháng)用的。兩(liǎng)個發(fā)明中均(jūn)有使用海藻糖。常用的多元醇類包括：山(shān)梨醇，甘露(lòu)醇(chún)和(hé)甘油（丙三(sān)醇）。其中甘露(lòu)醇和甘油(yóu)都(dū)是(shì)比較常用的(dí)。2，聚(jù)合物：聚(jù)合物具有(yǒu)能(néng)提高生(shēng)物(wù)製品混(hùn)合(hé)溶(róng)液(yè)的玻(bō)璃(lí)化(huà)轉變溫(wēn)度，同時起(qǐ)著(zhuó)低(dī)溫保護(hù)劑(jì)和(hé)脫(tuō)水保(bǎo)護(hù)劑(jì)的作用。其中(zhōng)，典(diǎn)型的(dí)的聚(jù)合(hé)物類(lèi)保護(hù)劑(jì)有聚乙烯吡咯(kǎ)烷酮(tóng)（PVP），牛血(xiě)清(qīng)（BSA），右(yòu)旋(xuán)糖苷(gān)（dextran），聚乙二醇(chún)（PEG）等(děng)。 3，表(biǎo)麵活性劑既(jì)能在(zài)凍結(jié)和脫水過(guò)程中降低冰水界麵張力(lì)所引起(qǐ)的(dí)凍(dòng)結和脫水(shuǐ)變性(xìng)；又(yòu)能在復水過程中(zhōng)對(duì)活(huó)性組分起(qǐ)到潤(rùn)濕劑和(hé)重褶(zhě)皺(zhòu)劑(jì)的作用(yòng)。 常用的包括吐溫\Triton X-100\蔗糖(táng)脂肪酸脂，十(shí)二(èr)烷(wán)基(jī)*，脂(zhī)肪(fáng)醇聚氧乙(yǐ)烯醚。4，氨(ān)基酸類的保(bǎo)護劑：如甘(gān)氨酸，穀氨酸(suān)等。這兩(liǎng)個(gè)配方中(zhōng)沒(méi)有添加(jiā)。氨基酸離(lí)子(zǐ)具(jù)有(yǒu)酸(suān)，鹼兩性，因此(cǐ)能夠(gòu)在生(shēng)物(wù)製品的(dí)低溫保存和(hé)冷凍幹燥過(guò)程中(zhōng)能(néng)抑(yì)製(zhì)溶(róng)液(yè)的pH變化(huà)，從而達到保護(hù)活性組分(fēn)的(dí)目(mù)的。
緩(huǎn)衝劑(jì)：調(tiáo)節PH，保(bǎo)持ph的穩定。常見(jiàn)的多(duō)為鹽(yán)類(lèi)如(rú)：磷酸(suān)，乙二胺四(sì)乙酸，氯化鈉，氯化鈣，磷酸(suān)鹽，醋酸鹽(yán)和檸檬酸鹽(yán)等(děng)。6，叔丁(dīng)醇(chún)：在凍(dòng)幹(gān)配(pèi)方(fāng)中(zhōng)加入適(shì)量的(dí)叔丁醇（Tertiary Butyl Alcohol）後，凍結時(shí)會(huì)形成針狀(zhuàng)結(jié)晶；冰(bīng)晶升(shēng)華(huá)後(hòu)，留下(xià)了(liǎo)管(guǎn)狀(zhuàng)通(tōng)道，使水(shuǐ)蒸汽(qì)流動(dòng)阻力(lì)大大減小(xiǎo)，升華速(sù)率(shuài)顯著提高。
從以上分(fēn)析可(kě)以看出基本上一(yī)個完整的凍幹(gān)保(bǎo)護劑體(tǐ)係是由(yóu)多(duō)種保(bǎo)護劑連用。其中有的(dí)起(qǐ)保(bǎo)護(hù)作用(yòng)，有(yǒu)的(dí)起(qǐ)調節(jié)穩(wěn)定作用，有的(dí)起(qǐ)加(jiā)速(sù)作用，還(huán)有(yǒu)的起(qǐ)填(tián)充劑(jì)和(hé)賦形(xíng)劑的作用。其實(shí)按(àn)照凍(dòng)幹保護劑的篩(shāi)選原(yuán)則(zé)，逐步(bù)篩(shāi)選(xuǎn)優(yōu)化就能(néng)找(zhǎo)到凍幹保護(hù)劑的組合配(pèi)方(fāng)。由於不(bù)同的熒(yíng)光PCR體係成分不一(yī)樣(yàng)，因(yīn)此(cǐ)所(suǒ)采(cǎi)用的(dí)凍幹保護(hù)劑量和種(zhǒng)類不同(tóng)，需(xū)要(yào)根(gēn)據(jù)情況(kuàng)選(xuǎn)擇(zé)合適(shì)的(dí)糖(táng)，多元醇(chún)，活性(xìng)劑及緩衝(chōng)劑等(děng)。
