微生(shēng)物菌種可以采用凍(dòng)幹法進行保(bǎo)存。凍幹法(fǎ)製備(bèi)的(dí)菌種(zhǒng)具有保(bǎo)存周(zhōu)期長，易活化，保(bǎo)存(cún)存活(huó)率(shuài)高(gāo)。具體(tǐ)方法(fǎ)步驟(zhòu)如(rú)下：
1，準(zhǔn)備安(ān)瓿瓶用(yòng)於真(zhēn)空冷凍(dòng)菌(jūn)種保藏(cáng)。安(ān)瓿瓶(píng)宜采(cǎi)用(yòng)中(zhōng)性玻璃(lí)製造，形(xíng)狀(zhuàng)可(kě)用長頸球(qiú)形底的。大(dà)小要求(qiú)外徑(jìng)6~7.5mm,長105 mm,球部直(zhí)徑9~11 mm,壁厚0.6~1.2 mm,也可用沒有球(qiú)部的管狀(zhuàng)安培管。先用2%鹽(yán)酸浸(jìn)泡(pào)8~10h,再經(jīng)自來水衝洗多次(cì),用蒸餾水(shuǐ)涮(shuàn)洗2~3次(cì),烘幹;在每管內放入打好菌(jūn)號(hào)及日(rì)期的標(biāo)簽(qiān),字麵朝(zhāo)向管壁,管(guǎn)口塞好脫脂棉(mián)塞,121℃下(xià)高壓(yā)滅菌20分鐘，備(bèi)用。
2，準備菌種(zhǒng)：用(yòng)真空冷凍幹(gān)燥法(fǎ)保藏(cáng)的菌(jūn)種保(bǎo)藏(cáng)期可長達(dá)幾年(nián)甚至幾十(shí)年。為了(liǎo)活(huó)性高，保存期長，所(suǒ)用菌(jūn)種純度(dù)要(yào)高，而且(qiě)菌齡要(yào)適宜。細菌(jūn)和酵(jiào)母菌的菌(jūn)齡(líng)要(yào)求(qiú)超(chāo)過(guò)對(duì)數生長期，若用對數生長期(qī)的菌(jūn)種(zhǒng)進(jìn)行(háng)保藏，其存活(huó)期(qī)反而(ér)降(jiàng)低。一(yī)般細(xì)菌的(dí)菌(jūn)齡要求24~48h。酵(jiào)母(mǔ)菌為(wéi)3d，形成(chéng)孢子的(dí)微(wēi)生物則宜保藏孢子。放(fàng)綫菌和絲狀(zhuàng)真(zhēn)菌菌齡為7~10d。
3，保護劑的選(xuǎn)擇和(hé)準備：選取(qǔ)新(xīn)鮮牛奶作為(wéi)保護劑，牛奶采用脫(tuō)脂牛(niú)奶，用離心(xīn)方法(fǎ)去除(chú)上層(céng)油(yóu)脂，115℃下高壓蒸汽滅(miè)菌25min,備用。或者(zhě)采用(yòng)微(wēi)生物專用(yòng)凍幹保護劑配(pèi)方(fāng)可以保持更高(gāo)的活性。我(wǒ)公司(sī)針(zhēn)對微(wēi)生(shēng)物凍幹開發(fā)保護劑，確保(bǎo)微(wēi)生物(wù)高活性凍(dòng)幹。
4，菌(jūn)種準備及(jí)分裝菌種：每(měi)支長(cháng)好(hǎo)的斜(xié)麵(miàn)加(jiā)2~3ml保護(hù)劑(jì)，用接種環將(jiāng)菌苔(tái)輕(qīng)輕刮起(注(zhù)意(yì)勿(wù)刮(guā)起(qǐ)培養(yǎng)基(jī)，製(zhì)成菌懸(xuán)液。如(rú)用液(yè)體培養(yǎng)的菌種(zhǒng),則需經離心收(shōu)集和用(yòng)滅(miè)菌生理鹽(yán)水(shuǐ)洗(xǐ)滌細(xì)胞(bāo)，收集的(dí)菌體用保護(hù)劑(jì)懸浮(fú)製成菌(jūn)懸液(yè)。懸液(yè)中(zhōng)菌數(shù)要(yào)求達(dá)到108~1010個/ml為(wéi)宜。懸液(yè)製(zhì)備完成(chéng)盡(jìn)快分裝和凍結。分裝安(ān)瓿時可用滅菌滴(dī)入安瓿管底(dǐ)部(bù)，每(měi)管(guǎn)分(fēn)裝量(liáng)約0.1~0.2毫(háo)升(shēng)，分(fēn)裝安(ān)瓿管時(shí)間(jiān)盡量要短，最好在1-2小時內分裝完畢(bì)並(bìng)預凍。分裝時應(yīng)注(zhù)意在(zài)無(wú)菌條件下操作(zuò)。
5，預凍-80℃冰(bīng)箱(xiāng)預凍(dòng)1~2小時或(huò)者在(zài)凍幹機(jī)內(nèi)預凍(dòng)3-6個小(xiǎo)時。
6，冷(lěng)凍(dòng)幹(gān)燥：將冷(lěng)凍後的(dí)樣(yàng)品安瓿管(guǎn)置於(yú)冷凍(dòng)幹燥機(jī)的幹燥箱內，開(kāi)始冷(lěng)凍幹(gān)燥，時間一般(bān)為8-20小時(shí)。終(zhōng)止(zhǐ)幹燥時間應(yīng)根(gēn)據(jù)下列情(qíng)況判(pàn)斷:①安瓿(bù)管內(nèi)凍幹物呈酥(sū)塊狀或鬆散(sàn)片狀;②真空(kōng)度接近空載(zǎi)時的極限真空(kōng)。③選(xuǎn)用1-2支(zhī)對(duì)照管，其水份(fèn)與菌(jūn)懸液同(tóng)量，視為(wéi)幹燥完結。
7，封口(kǒu)抽真空(kōng)幹燥後，取(qǔ)出(chū)安(ān)培瓶(píng)，接在(zài)封(fēng)口(kǒu)用(yòng)的玻璃管上，可用L形五通管繼續(xù)抽(chōu)氣,約(yuē)10min即(jí)可達到26.7Pa(0.2mmHg。於(yú)真(zhēn)空狀(zhuàng)態下(xià),以(yǐ)煤(méi)氣(qì)噴燈的細(xì)火焰在安培管頸(jǐng)中(zhōng)央進行封口(kǒu)。
8，保(bǎo)藏(cáng)安瓿(bù)管(guǎn)保藏在(zài)-20℃冰箱(xiāng)裏(lǐ)。
9，凍幹法保(bǎo)存的(dí)菌種活(huó)化：如果(guǒ)要從中取(qǔ)出菌種(zhǒng)恢復培養,可先用(yòng)75%酒(jiǔ)精將管(guǎn)的(dí)外(wài)壁(bì)消毒，用(yòng)鑷(niè)子(zǐ)敲(qiāo)下已(yǐ)開裂(liè)的(dí)安瓿管(guǎn)的(dí)頂端，使管子破(pò)裂(liè)，在(zài)安瓿管中(zhōng)加入0.5~1ml液體培(péi)養(yǎng)基(jī)，慢慢(màn)旋轉(zhuǎn)安瓿管，使凍(dòng)幹菌種(zhǒng)復水，然後直(zhí)接接種到瓊脂(zhī)斜麵或塗布平板。凍幹法(fǎ)保(bǎo)存的菌(jūn)種方(fāng)便活(huó)化，活性高。
