隨著臨(lín)床醫學(xué)及生(shēng)物診斷(duàn)試劑(jì)的發展,為(wéi)了(liǎo)滿足臨床需要,需(xū)要(yào)發明一種使用(yòng)方(fāng)麵(miàn),不需要低溫(wēn)保存及(jí)運輸的(dí)熒光PCR擴(kuò)增(zēng)試劑(jì)。
熒(yíng)光(guāng)PCr反(fǎn)應(yīng)體係(xì)中含有熒(yíng)光探針(zhēn)等試劑需(xū)要低溫(wēn)保存及避(bì)免其(qí)化學性質(zhì)發生變(biàn)化(huà),因此需(xū)要(yào)采(cǎi)用凍(dòng)幹(gān)的(dí)方(fāng)法。說到(dào)熒(yíng)光PCr擴增試劑的(dí)凍(dòng)幹,其實(shí)跟(gēn)其他藥品或(huò)診(zhěn)斷試劑原(yuán)理上沒(méi)什麼區(qū)別(bié)。主要(yào)方法步(bù)驟(zhòu)包括(kuò)。
1,配液(yè)。將熒光PCR擴(kuò)增(zēng)緩衝液,引(yǐn)物,探針(zhēn),啟(qǐ)動(dòng)酶等及凍(dòng)幹(gān)保(bǎo)護(hù)劑,按照配(pèi)方(fāng)進(jìn)行混(hùn)合配液。我們都(dū)知道(dào)凍幹(gān)的藥物(wù)或診(zhěn)斷試(shì)劑,其(qí)中(zhōng)凍幹保護劑包含賦型劑(jì)等的選擇(zé)非(fēi)常(cháng)重要。常(cháng)見的(dí)凍(dòng)幹(gān)保護劑包括(kuò)糖(táng),多元醇類(lèi),聚合物(wù),表(biǎo)麵(miàn)活性(xìng)劑類,氨(ān)基酸類,鹽類等(děng)。而(ér)一(yī)種凍(dòng)幹(gān)試(shì)劑,通常(cháng)是(shì)不是添加一種保護(hù)劑,而是(shì)多種(zhǒng)保護(hù)劑(jì)連用(yòng)。也(yě)就是我們(mén)這(zhè)個試(shì)劑(jì)配(pèi)方(fāng)的(dí)摸索(suǒ)其(qí)實是相對來說zui耗(hào)時(shí)間,也(yě)是(shì)關鍵所在(zài)。如:熒光PCR擴(kuò)增(zēng)試劑(jì)的凍(dòng)幹添(tiān)加甘(gān)油,海藻糖,牛(niú)血(xiě)清蛋白(bái),甲(jiǎ)酰胺(àn)等。通(tōng)常是多(duō)種(zhǒng)一(yī)起(qǐ)用(yòng)。
2,凍(dòng)幹。將上述(shù)凍幹(gān)液(yè)體配製好(hǎo),分(fēn)裝到PCR擴增(zēng)管(guǎn)或者八(bā)連管中。然(rán)後(hòu)放(fàng)入凍幹機(jī),開始(shǐ)進行整(zhěng)個凍幹過程(chéng)。對(duì)於(yú)凍幹診(zhěn)斷(duàn)試劑由於一(yī)般量很(hěn)少,一個管內通常(cháng)有(yǒu)50uL或者(zhě)30ul,量很小,凍(dòng)幹工(gōng)藝(yì)優化(huà)好的話(huà),一(yī)般幾(jī)個小時(shí)就可(kě)以凍(dòng)一(yī)批(pī)。如將分裝好的(dí)試(shì)劑放入(rù)凍幹(gān)機中,在-35度預凍(dòng)三(sān)小時(shí)。預凍(dòng)完成後,凍(dòng)幹機內(nèi)溫(wēn)度不(bù)變(biàn),開(kāi)始抽真(zhēn)空降(jiàng)到(dào)10pa處(chǔ)理兩(liǎng)個(gè)小(xiǎo)時。2個小(xiǎo)時升華結束後,真空狀(zhuàng)態下(xià)將(jiāng)凍幹(gān)機內部溫(wēn)度升至(zhì)10度(dù),真(zhēn)空(kōng)處理兩(liǎng)小(xiǎo)時(shí)。真空(kōng)狀態下繼續(xù)將(jiāng)凍(dòng)幹機(jī)內(nèi)部(bù)溫度升至30度,處(chǔ)理(lǐ)兩小時。這(zhè)樣整個(gè)凍幹就完成了(liǎo),整(zhěng)個(gè)過程9個小時,凍幹完(wán)畢,蓋(gài)上擴征(zhēng)管或8連管蓋。通(tōng)過這(zhè)樣凍幹(gān)的(dí)方法製(zhì)備好(hǎo)的熒(yíng)光(guāng)PCR凍幹粉(fěn),四季常(cháng)溫避光(guāng)保存(cún),性(xìng)質(zhì)穩定(dìng),運(yùn)輸(shū)方便,使用(yòng)方便,使(shǐ)用時(shí)隻需(xū)要添加溶解即可。
任何一(yī)種含(hán)熒(yíng)光探針(zhēn)的PCR試(shì)劑(jì)或(huò)者其(qí)他試劑(jì)如果想通過(guò)凍幹的(dí)方法獲得穩(wěn)定的粉(fěn)或(huò)者凍幹微球,其實都(dū)是可(kě)以做(zuò)成(chéng)的(dí),主要的是(shì)凍幹配方的研究,對於(yú)凍(dòng)幹(gān)機選擇製(zhì)藥用,工藝全的即可(kě)。
以上(shàng)醫療診(zhěn)斷凍幹(gān)機係列,就可(kě)以(yǐ)用(yòng)於診斷試(shì)劑,PCR熒光試(shì)劑的凍幹(gān),各種生物(wù)試(shì)劑及(jí)體外試劑(jì)均可(kě)以(yǐ)。