微(wēi)生物(wù)的保存(cún)方法很(hěn)多(duō)，根(gēn)據(jù)不(bù)同(tóng)的(dí)微(wēi)生(shēng)物(wù)菌（毒）株或不(bù)同的(dí)實驗要(yào)求，可選用不(bù)同(tóng)的保存方(fāng)法，其中(zhōng)常(cháng)見的(dí)有(yǒu)斜(xié)麵(miàn)保(bǎo)存法(fǎ)，穿(chuān)刺保存法，液體(tǐ)石(shí)蠟(là)保(bǎo)藏法，沙土管(guǎn)保存法，冷(lěng)凍(dòng)保(bǎo)存法(fǎ)，真(zhēn)空冷(lěng)凍幹(gān)燥(zào)保存法。其中(zhōng)真空(kōng)冷凍幹(gān)燥保(bǎo)存法(fǎ)方(fāng)便復活，保存(cún)期長(cháng)，運(yùn)輸和保(bǎo)存方(fāng)便(biàn)，活菌(jūn)率高。
冷(lěng)凍幹燥是(shì)將菌體懸(xuán)浮(fú)液冷凍(dòng)到冰(bīng)點以下(xià)，從而(ér)轉(zhuǎn)變為(wéi)固體結晶態，然後(hòu)在低溫(wēn)低壓(真(zhēn)空)下(xià)使固體升(shēng)華而(ér)脫水(shuǐ)的(dí)幹燥(zào)方法。一般(bān)幹(gān)燥處理過(guò)程(chéng)會(huì)破壞(huài)微(wēi)生(shēng)物的細胞膜，引起細(xì)胞的(dí)大量死亡，因此需(xū)要(yào)添加保(bǎo)護劑，能夠(gòu)使菌液(yè)密(mì)度(dù)均一，減少活菌(jūn)在凍(dòng)幹過程(chéng)中(zhōng)的(dí)機(jī)械(xiè)效應(yīng)和溶(róng)質效(xiào)應帶(dài)來(lái)的(dí)死(sǐ)亡(wáng)。因(yīn)此，在凍(dòng)幹前加入的(dí)保護劑(jì)配(pèi)方就(jiù)成(chéng)為了至(zhì)關(guān)重要(yào)的(dí)決(jué)定(dìng)性(xìng)因素，它(tā)既會影響到儲存(cún)期(qī)細(xì)胞的活性(xìng)以及穩(wěn)定(dìng)性，也會影響到(dào)復(fù)水時(shí)細(xì)胞(bāo)存活(huó)率。
凍幹法是長(cháng)期保存細菌，酵(jiào)母，真菌(jūn)，病毒和立克次氏(shì)體的標準(zhǔn)方(fāng)法(fǎ)（在凍(dòng)幹前一(yī)般要(yào)加(jiā)冷(lěng)凍(dòng)保護(hù)劑，這(zhè)樣可(kě)使細胞(bāo)免(miǎn)除在冷凍(dòng)初期因形(xíng)成冰(bīng)晶(jīng)而(ér)造成的(dí)損害。ATCC 常(cháng)規用(yòng)10％脫脂(zhī)奶或(huò)12％蔗糖作為(wéi)冷凍(dòng)保護劑，而美國(guó)農業(yè)部(bù)（USDA）的農(nóng)業研究服務機(jī)構(gòu)的實驗(yàn)人(rén)員用牛或馬(mǎ)血清作(zuò)為微生(shēng)物(wù)的(dí)冷(lěng)凍保護劑(jì)（。在菌液中加入甘(gān)油(yóu)和二(èr)甲(jiǎ)亞碸(fēng)（DMSO）也可(kě)防(fáng)止冷凍中微生物(wù)的(dí)死亡(wáng)，但實際(jì)操(cāo)作中(zhōng)應根(gēn)據不同(tóng)微(wēi)生(shēng)物決(jué)定應用或(huò)不用(yòng)保(bǎo)護(hù)劑(jì)。
真空(kōng)冷凍(dòng)幹燥(zào)法保存(cún)菌(jūn)種(zhǒng)的步驟(zhòu)主要包括：
1，微生(shēng)物(wù)培(péi)養，培養獲得健壯(zhuàng)的菌(jūn)種(zhǒng)擴培(péi)液體(tǐ)。培(péi)養(yǎng)時(shí)根(gēn)據菌(jūn)種選擇不(bù)同(tóng)的(dí)培養基。培養(yǎng)到(dào)對數期(qī)獲得大(dà)量健(jiàn)壯的(dí)菌種(zhǒng)，保(bǎo)證菌體濃度(dù)，一(yī)般(bān)達(dá)到(dào)109的濃度(dù).
2，離心收集(jí)菌體。通(tōng)過(guò)離心(xīn)法(fǎ)從(cóng)液(yè)體(tǐ)培(péi)養基中獲得菌體。如果是固(gù)體(tǐ)培養(yǎng)基(jī)可以(yǐ)直(zhí)接(jiē)收集(jí)菌(jūn)落(là)，用(yòng)保護(hù)劑(jì)溶解(jiě)混匀。
3，將(jiāng)菌體，脫(tuō)脂奶粉(fěn)，海藻(zǎo)糖，蔗糖等(děng)保(bǎo)護(hù)劑在無菌(jūn)水中(zhōng)混(hùn)匀得到含有(yǒu)保護(hù)劑的菌體(tǐ)混(hùn)懸(xuán)液。
4，分裝。將菌體混(hùn)懸液(yè)在無(wú)菌(jūn)環境中分裝到(dào)無(wú)菌容(róng)器中(zhōng)，可(kě)以(yǐ)是安瓿瓶，西林(lín)瓶，EP，培(péi)養皿等。
5，預凍，預(yù)凍是非常(cháng)關鍵的(dí)。預凍(dòng)不好，菌(jūn)體會死(sǐ)亡。要快速(sù)預凍，防(fáng)止產(chǎn)生大冰晶(jīng)造成(chéng)細胞死亡。預(yù)凍要(yào)凍結(jié)實(shí)，保證預(yù)凍充分(fēn)。
6，將(jiāng)預(yù)凍(dòng)好(hǎo)的菌體，放入(rù)真(zhēn)空冷(lěng)凍(dòng)幹(gān)燥(zào)設備(bèi)中進(jìn)行凍幹。如(rú)果是設備(bèi)帶預凍功能，也(yě)可(kě)以(yǐ)直接(jiē)在凍(dòng)幹機上(shàng)進行(háng)預凍。真空冷凍幹(gān)燥(zào)時(shí)間(jiān)和凍(dòng)幹(gān)曲綫的 設計要根據菌(jūn)種的(dí)不同和菌體混懸液(yè)的濃(nóng)度等進(jìn)行設計。凍(dòng)幹(gān)好(hǎo)後真空(kōng)密封保(bǎo)存。
微生物凍(dòng)幹法采(cǎi)用的凍幹(gān)設備(bèi)可(kě)以(yǐ)有多種選擇，從實(shí)驗室凍(dòng)幹(gān)機到(dào)研(yán)發型凍(dòng)幹機都可以(yǐ)適(shì)用。如(rú)以下係(xì)列(liè)凍幹機都可(kě)以用來凍幹保(bǎo)存微(wēi)生(shēng)物。
型號(hào) | Pilot2-4L | Pilot2-4M | Pilot2-4H |
凍幹麵積(jī) | 0.2㎡ | 0.2㎡ | 0.2㎡ |
冷阱(jǐng)溫度(空(kōng)載） | -55℃ | -85℃ | -85℃ |
真空度(dù)（空載） | <6Pa | ≤1Pa | ≤1Pa |
板(bǎn)層尺寸（mm） | 375*270 | | |
板(bǎn)層(céng)溫度（空載） | -40℃ | -55℃ | -55℃ |
板層(céng)製(zhì)冷方(fāng)式 | 矽(guī)油(yóu)循(xún)環 | 矽油(yóu)循(xún)環 | 矽油循環 |
箱(xiāng)阱結(jié)構 | 箱(xiāng)阱一體式 | 箱(xiāng)阱(jǐng)一體(tǐ)式 | 箱(xiāng)阱分離式(shì) |
捕水能力 | 4L | 4L | 4L |
凍幹(gān)效(xiào)率(shuài) | 3L/24H | 3L/24H | 3L/24H |
板層間距 | 80mm | 80mm | 80mm |
壓塞(sāi) | 手動(dòng) | 手(shǒu)動(dòng) | 手動(dòng) |
壓(yā)縮機(jī)功(gōng)率(shuài) | 7/8HP | 2*7/8HP | 2*7/8HP |
真(zhēn)空(kōng)泵 | 2L/S | | |
整機尺(chǐ)寸
（約） | W660*D850*H1440 | W660*D850*H1440 | W660*D960*H1440 |
